論文摘要:目的：探討正常妊娠及妊高征（ PIH）孕婦胎盤組織bcl－2、bax及 ki67基因的表達及其相互關系。方法：采用免疫組化方法測定正常早、中、晚期妊娠30例及輕、中、重度 PIH36例的胎盤組織 bcl－2、bax及ki67的表達。結果：（l）bcl－2表達主要定位在絨毛的合體滋養層細胞（S－cells），而 bax在 S－cells和細胞滋養層細胞（C－ceIIs）均呈陽性，在絨毛間質中baX也呈陽性表達，但強度低于滋養層細胞。ki67定位于C－ceIIs；（2）bcl－2在晚期妊娠組的陽性率低于早、中期妊娠組（P＜0．05）。ki67在正常早、中、晚期妊娠組，對照組與PIH組，輕、中、重度 PIH組之間均有顯著性差異（ P＜0.01）；（3）bcl－2和 bax表達及與ki67的表達無相關性（P＞0．05）。結論：bcl－2及 bax在高水平上達到平衡，在胎盤組織中并不起介導細胞凋亡的主導作用，而且二者的表達不影響細胞的增殖。

關鍵詞:胎盤細胞凋亡bcl-2baxki67

論文:人類胎盤不僅在胎兒—胎盤—母體的關系上起中心軸的作用，而且功能上失調會導致母體和胎兒的病理性變化，隨著妊娠的進展，絨毛和滋養層不斷成熟和分化，已發現許多物質包括原癌基因產物，在胎盤有生理性的表達。胎兒的發展特征是細胞群增殖和誘導或抑制細胞凋亡成熟起來的，因此，胎盤在妊娠期間也經歷著相似的變化。我們通過測定胎盤組織中細胞凋亡調控基因bcl-2、bax及細胞增殖基因ki67，進一步探討了妊娠高血壓綜合征（PIH）的病理性變化。

1資料與方法

1.1臨床資料隨機選擇1998年11月至1999年4月白求恩醫科大學第二臨床醫院及長春市婦產醫院婦科門診及產科病房的孕產婦66例。（1）妊高征組36例，平均26.14±3.42歲,平均孕37.44±3.9周,輕度9例,中度10例,重度17例；(2)正常妊娠組30例，孕早期10例，平均25.25±3.80歲，平均孕9.03±1.11周；孕中期5例，平均26.55±3.93歲，平均孕24.05±3.63周；孕晚期（對照組）15例，平均27.76±3.38歲，平均孕39.82±1.32周。

1.2標本采集及處理孕早期是行人工流產術者，孕中期是來自無妊娠合并癥、并發癥，要求終止妊娠而行水囊引產者，孕晚期為單胎足月初產婦，無妊娠合并癥、并發癥、以自然分娩及擇期剖宮產手主結束分娩，其剖宮產指標主要是頭盆不稱及社會因素。妊高征組孕婦是無慢性高血壓、慢性腎炎及其它心腎疾病的病史者。

早孕絨毛組織不需進一步處理，取出后用生理鹽水沖洗凈，即用10%福爾馬林液固定。中、晚期胎盤組織于分娩后立即在母體面（避開鈣化、機化灶）隨機取3個不同區域約2cm×2cm×2cm胎盤組織，生理鹽水沖洗干凈后立即放入10%福爾馬林固定液中。

1.3方法用免疫組化SP法，抗bcl-2、抗bax、抗ki67單克隆抗體即用型及SP試劑盒均購自福州邁新生物工程公司。每次染色均設陽性和陰性對照。

1.4結果判定由2名醫師獨立觀察切片中10個高倍視野。（1）陽性標準：SP法顯示bcl-2及bax定位于胞漿和胞膜內，反應產物為棕黃色。根據顯色程度分為4級：（-）為無著色，（+）為淡黃色，（++）為棕黃色，（+++）為棕褐色;（2）SP法顯示ki67以細胞核呈清晰棕褐色為陽性，按陽性細胞占C-cells的比例分為：陽性細胞數＜10%為（-）；10%-20%為（+）；20%-30%為（++）；＞30%為（+++）。

1.5統計學分析Fisher精確概率檢驗法，兩組計數資料用等級相關分析。

2結果

2.1正常妊娠期胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達bcl-2表達主要定位在絨毛的S-cells，而bax在S-cells和C-cells均呈陽性，同時在絨毛間質中bax也呈陽性表達，但強度低于滋養層細胞；ki67蛋白主要定位在C-cells。bcl-2在晚期妊娠組的陽性率明顯低于早、中期妊娠組（P＞0.05）；ki67在晚期妊娠組的陽性率明顯低于早、中期妊娠組（P＜0.01）。早、中、晚期妊娠組bcl-2的表達強度與ki67的表達強度無相關性（P＞0.05），bax與ki67也無相關性（P＞0.05）。

2.2妊高征與正常晚期妊娠胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達bcl-2的陽性率在對照組與PIH兩組間差異無顯著性（P＞0.05），bax兩組差異無顯著性（P＞0.05），對照組ki67的陽性率明顯低于PIH組（P＜0.01）。bcl-2與ki67的表達強度無相關性（P＞0.05），bax與ki67也無相關性（P＞0.05）。

2.3妊高征胎盤組織中bcl-2、bax及ki67的基因表達bcl-2的陽性率在輕、中、重度PIH3組間差異無顯著性（P＞0.05），bax在3組間差異也無顯著性（P＞0.05），而ki67在輕度PIH組的陽性率明顯低于中、重度組（P＜0.01）。PIH輕、中、重度組妊娠bcl-2的表達強度與ki67的表達強度經等級相關分析無相關性（P＞0.05），bax與ki67也無相關性（P＞0.05）。

3討論

3.1正常妊娠與妊高征胎盤組織bcl－2、bax的基因表達bcl－2是細胞凋亡的重要抑制基因。本研究中免疫組化已確定bcl－2定位在S－cell表達，并且從正常早孕到晚期妊娠持續出現[3，6]，因此保留滋養層細胞團可能是維持妊娠的一種機制[1]。晚期妊娠bcl－2表達下降、可能是因為bcl－2正常生理性功能，在孕晚期組成胎盤的細胞不再需要存活，可能是細胞凋亡的一種早期生物學變化，也可能與分娩有關[2]。

目前已知bcl－2和bax是bcl－2家族中重要成員。bcl－2表達水平較高時，可形成bcl－2和bax的異源二聚體，細胞凋亡受到抑制； bax表達水平較高時，可形成bax－bax同源二聚體，加速細胞凋亡。本研究中，對照組bcl－2與bax的陽性率為66．7％與80％，PIH組的陽性表達均為75％，表明大多數胎盤組織均呈bcl－2與bax高表達。bcl－2和bax表達已在一定水平上達到平衡，所以在胎盤組織中不起介導細胞凋亡的主導作用。

PIH組的bax并無隨病情的嚴重程度而有下降的趨勢，說明bax會進一步影響妊娠的結局，反映病情的嚴重程度。這些結果可能提示，胎盤的細胞凋亡并不是bax單獨起作用，但有待進一步證實。

3．2正常妊娠與妊高征胎盤組織中ki67的表達及bcl－2、bax的關系ki67同細胞增殖核抗原（PC－NA）、拓樸異構酶Ⅱ一樣，在細胞群和組織中可作為增殖細胞的選擇性標記。在細胞周期S、G2、M期均有表達，而G0期缺如。本研究中在C－cells中表達，妊娠早期表達最豐富，妊娠中期次之、晚期表達最少，提示早期胎盤活性是高增殖的[3]。在妊高征組中ki67表達多為強陽性，提示hi67的過度表達與C－cells活性有關。在PIH中，胎盤局部缺血是由于子宮胎盤血流下降引起[4]，因為S－cells對缺血缺氧敏感，導致S－cells受損，所以出現代償性的過早成熟的C－cells增生。這種病理變化可能是S－cells損傷或壞死的指征，增生的C－cells修復和補償受損的S－cells，這種結果可能是絨毛對血流障礙的代償性反應。Redline等[5]報道在先兆子癇胎盤中間層滋養細胞表達PCNA時顯示陽性，但bcl－2為陰性。本組孕32周重度PIH胎死宮內1例，其bcl－2表達為陰性，bax與ki67均為陽性，但病例少，需積累更多病例探討。

分析ki67與bcl-2及baX的關系，未發現它們之間有相關性，說明bcl－2和bax在胎盤發生過程中不引起細胞增殖，只是通過阻止細胞凋亡和延長細胞存活，增多細胞數量。ki67的表達增加說明C－cells增殖可能與其他基因的異常有關，如 p53、ras和myc等，是多種基因產生不同的途徑，在PIH中Ca2濃度的變化，TNF-α的變化等都可能直接或間接影響細胞凋亡。近年又報道，IL－10、Fas也參與細胞調亡[6，7]，因此，引起細胞凋亡并非一、兩種因子，而是多種因子共同作用的結果。